产品说明书：

https://www.ludger.com/docs/products/lt/lt-kab-vp96/ludger-lt-kab-vp96-guide.pdf

产品规格

2 - AB（2 - 氨基苯甲酰胺）是糖基化分析中最广泛使用的荧光标记物之一。Ludger标记（LudgerTag）2 - AB标记试剂盒包含标记多达30个聚糖样本所需的所有试剂。

有两种试剂盒可供选择，它们所提供的还原剂类型不同：氰基硼氢化钠或无毒的2 - 吡啶硼烷。

部件编号      还原剂

LT - KAB - VP96        2 - 吡啶硼烷——96个样本

LT - KAB - A2            氰基硼氢化钠——24个样本

LT - KAB - VP24       2 - 吡啶硼烷——24个样本

传统的2 - AA和2 - AB标记试剂盒在聚糖标记过程中使用氰基硼氢化钠作为还原剂。这种试剂有毒，因此在操作时需要使用通风橱。为了符合新兴的健康和安全法规，我们现在用新的VP聚糖试剂盒替代它们，该试剂盒使用2 - 吡啶硼烷，这是一种安全性显著提高的还原剂。

2 - AB标记试剂盒包含两组以下试剂（每套试剂可标记15个样本），试剂装在纯氮气密封的玻璃安瓿中：

样本数量：一个2 - AB标记试剂盒包含可标记多达30个独立分析样本的试剂。

染料纯度：通过高效液相色谱（HPLC）测定的纯度 > 99%。

分子量：137。

激发波长（Lambda - Ex）：250纳米。

发射波长（Lambda - Em）：428纳米。

样本用量：每个样本的聚糖用量范围为25皮摩尔至25纳摩尔。

适用样本：任何具有游离还原末端的纯化聚糖均可进行标记。

结构完整性：唾液酸、岩藻糖、硫酸盐或磷酸盐的损失不可检测（< 2摩尔百分比）。

标记效率：通常 > 85%（取决于样本）。

标记选择性：基本实现化学计量标记。

操作流程

1. 纯化聚糖：Ludger 纯化（LudgerClean）EB10小柱（LC - EB10 - A6）专为从蛋白质、盐和洗涤剂中纯化聚糖而设计。

2. 将样本转移至反应管：对于从典型糖蛋白中获得的聚糖混合物，样本量应在100皮摩尔至50纳摩尔范围内。如果是单一纯聚糖，最少5皮摩尔就可在后续高效液相色谱分析中被标记和检测到。合适的反应管包括小型聚丙烯微量离心管和用于聚合酶链反应（PCR）的管子。

3. 干燥样本：如果样本体积超过10微升，则需干燥样本。

如果需要干燥样本，应使用离心蒸发器进行。如果不可行，则可谨慎使用冷冻干燥（冻干法）（尤其要确保样本在管底形成一小团紧密的固体）。不要使样本处于高温（> 28°C）或极端pH条件下，因为这些条件会导致酸催化唾液酸丢失（高温、低pH）或聚糖还原端差向异构化（高pH）。

样本干燥后，将其重悬于10微升水中。

4. （仅适用于LT - KAB - A2）制备DMSO - 乙酸混合液：向装有DMSO的管中加入150微升冰醋酸，通过移液操作混合均匀。

5. 加入染料：将DMSO - 乙酸混合液加入到装有2 - AB（2 - 氨基苯甲酰胺酸）染料的管中，混合至染料完全溶解。

6. 加入还原剂：将溶解后的染料加入到装有氰基硼氢化钠或2 - 吡啶硼烷的管中，通过移液操作混合至还原剂完全溶解，制成最终的标记试剂。

7. 将标记试剂加入样本：向每个干燥的聚糖样本中加入标记试剂，盖紧微量离心管，充分混合。

8. 孵育：将反应管置于加热块、砂浴盘或设定为65°C的干燥烤箱中孵育3小时。在大多数情况下，孵育时间可缩短至2小时或延长至4小时，而不会显著改变标记反应的结果。

9. 离心并冷却：孵育结束后，取出样本，短暂离心微量离心管，然后让其完全冷却至室温。

10. 样本清洗：建议进行标记后样本清洗，以去除多余的染料和其他标记试剂。清洗可使用卢德里格清洁（LudgerClean）T1小柱（LC - T1 - A6）或S小柱（LC - S - A6）完成 。