产品规格

单糖分析是国际人用药品注册技术协调会（ICH）Q6B指南中规定的生物制药表征的一项法规要求。这些信息可在药物研发的所有阶段用作确定糖基化类型（N - 连接和/或O - 连接）以及糖基化发生程度的方法。在生产工艺的质量控制（QC）批次放行过程中，也可用于证明不同批次之间的一致性。

一套Ludger标记单糖分析试剂盒包含的试剂能够对每套试剂（每组48个样本）最多96个独立分析样本进行释放和标记操作。通常，每个样本分析50微克的糖蛋白。

单糖分析的方法如下：

产品说明书：

https://www.ludger.com/docs/products/lt/lt-mono-96/ludger-lt-mono-96-guide.pdf

1. 通过温和酸水解从糖蛋白中释放单糖。

2. 用2 - 氨基苯甲酸（2AA）对释放的单糖进行荧光标记。

3. 通过高效液相色谱（HPLC）或超高效液相色谱（UHPLC）对2AA标记的单糖进行相对定量分析。

该试剂盒还包含Ludger标记MonoMix，这是一种含有葡糖胺、半乳糖胺、半乳糖、甘露糖和岩藻糖的单糖标准品。木糖被用作内标。

提供了两种水解酸。2摩尔三氟乙酸（2M TFA）和6摩尔盐酸（6M HCl）。2M TFA适用于释放中性单糖，但对于N - 乙酰葡糖胺（GlcNAc）和N - 乙酰半乳糖胺（GalNAc）单糖效果较差，对于这些单糖我们建议使用6M HCl。我们建议您对样本的不同复制品分别使用这些酸。

Ludger标记释放试剂

三氟乙酸 – 2M TFA

盐酸 – 6M HCl

Ludger标记单糖分析定量标准品

MonoMix单糖标准品 – 葡糖胺、半乳糖胺、半乳糖、甘露糖和岩藻糖各10纳摩尔。

木糖标准品 – 100纳摩尔 – 用作精确计量的内部参考标准。

我们还推荐一种纯化的糖肽标准品。Ludger开发了一种定量标准品（BQ - GPEP - A2G2S2 - 10U），这是一种以两个N - 乙酰神经氨酸结尾的复杂双天线N - 连接聚糖。使用这种标准品能够让您检查聚糖释放、标记和回收的效率，并使您对单糖测量的准确性更有信心。

高效液相色谱（HPLC） – 标记单糖的定量分析

根据您实验室中使用的是HPLC还是超高效液相色谱（UHPLC）系统，我们提供两种柱子用于分析标记的单糖。如果使用HPLC，Ludger Sep R2柱（目录编号LS - R2 - 4.6×150）能很好地将大多数N - 连接和O - 连接聚糖中存在的七种主要单糖分离。如果您有超高效液相色谱系统，我们推荐使用Ludger Sep uR2柱（目录编号LS - UR2 - 2.1×50），该柱每个样本的分离时间为8分钟。

溶剂：本指南中的聚糖分析梯度基于以下溶剂：

溶剂A：BPT溶剂 – 以纯化水为基础的溶剂，含有0.2%丁胺（每升2毫升）、0.5%磷酸（每升5毫升）、1%四氢呋喃（每升10毫升）。

溶剂B：50%乙腈 : 50%溶剂A

为什么单糖分析如此重要？

https://www.ludger.com/presentation/monosaccharide-analysis/