产品说明书链接：

https://www.ludger.com/docs/products/lz/lz-rpngasef/ludger-lz-rpngasef-kit-guide.pdf

**产品规格：**

Ludger酶PNGase F是一种从伊丽莎白女王菌克隆并在大肠杆菌中表达的重组糖苷酶。该酶不含甘油（在高效液相色谱密集型方法中可达到最佳性能），同时配有反应缓冲液、变性溶液和NP - 40溶液，以实现高效的脱糖基化。

**应用：**

Ludger酶肽N - 糖苷酶F（PNGase F）适用于溶液中以及固定样品中的N - 连接糖基的释放。该酶在其与蛋白质上天冬酰胺残基的连接点处，在寡糖部分的内部最内侧的GlcNAc之间进行切割，随后将天冬酰胺转化为天冬氨酸。具有游离还原端的释放出的糖基可使用Ludger标记技术进行标记，以便进行荧光检测和高灵敏度的质谱检测。

**来源：**

伊丽莎白女王菌（宿主为大肠杆菌）

**酶学编号（EC）：**

3.5.1.52

**试剂盒包含：**

- **Ludger重组PNGase F - 试剂盒成分**

    - PNGase F（伊丽莎白女王菌）：配于50 mM NaCl、5 mM EDTA、20 mM Tris - HCl（pH 7.5）中，每瓶0.15 mL，共1瓶。

    - 10×反应缓冲液：500 mM磷酸钠（1×稀释时pH 7.5），每瓶1.0 mL，共1瓶。

    - 10×变性溶液：5% SDS、400 mM二硫苏糖醇（DTT），每瓶1.0 mL，共1瓶。

    - NP - 40 10%溶液：每瓶1.0 mL，共1瓶。

**建议使用方法：**

**变性反应条件：**

1. 用超纯水将样品体积补足至9 μL。

2. 向每个糖蛋白样品中加入1 μL的10×变性溶液。盖紧反应管，充分涡旋振荡后短暂离心，确保样品完全溶解。

3. 将样品在100°C孵育10分钟。

4. 向每个糖蛋白样品中加入2 μL的10×反应缓冲液。

5. 加入2 μL的10% NP - 40溶液。

6. 加入6 μL的水，将反应体积调整至20 μL。

7. 加入1 μL的PNGase F。盖紧反应管，轻轻混匀后短暂离心。

8. 将样品在37°C孵育1小时。

**特异性：**

PNGase F适用于从糖蛋白和糖肽中释放所有类型（高甘露糖型、杂合型和复杂型）的N - 糖基。Xaa - Asn - Xaa序列是该酶的最小肽底物。需要注意的是，一些来自植物、昆虫和寄生虫等非哺乳动物来源且携带α1 - 3连接核心岩藻糖的非哺乳动物糖基，PNGase F无法对其进行切割。对于这些样品，可使用PNGase A。

**样品数量：**

试剂盒中含有75,000单位的PNGase F，浓度为500,000单位/ml，大约可供150个样品使用。

**样品用量：**

作为指导原则，每个样品的糖蛋白用量不超过100 μg。

**适用样品：**

含有N - 连接糖基的糖蛋白和糖肽。

**储存条件：**

4°C储存。避免热源和光照。

**热失活：**

PNGase F在75°C下孵育10分钟后失活。

Ludger 是一家位于英国专门从事药物的糖基化分析和研究的生物科技公司。

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