产品说明书：

https://www.ludger.com/docs/products/lt/lt-kab/lt-kab-a2-guide-v3.1-page-16.pdf

产品规格

应用：用于用2 - 氨基苯甲酰胺酸（2 - AB）标记游离聚糖。

描述：该试剂盒包含通过与还原胺化反应将染料共价连接到聚糖游离还原端的试剂。

传统的2 - 氨基苯甲酸（2 - AA）和2 - 氨基苯甲酰胺（2 - AB）标记试剂盒在聚糖标记过程中使用氰基硼氢化钠作为还原剂。这种试剂有毒，因此在操作时需要使用通风橱。为了符合新兴的健康和安全法规，我们现在用新的VP聚糖试剂盒替代它们，该试剂盒使用2 - 吡啶硼烷，这是一种安全性显著提高的还原剂。

2 - AB标记试剂盒包含两组以下试剂（每套试剂可标记15个样本），试剂装在纯氮气密封的玻璃安瓿中：

LT - KAB - A2

2 - 氨基苯甲酰胺（2 - AB染料）

二甲基亚砜（DMSO）

乙酸

氰基硼氢化钠

LT - KAB - VP24

2 - 氨基苯甲酰胺（2 - AB染料）

二甲基亚砜（DMSO）/乙酸溶液

2 - 吡啶硼烷

样本数量：一个2 - AB标记试剂盒包含可标记多达30个独立分析样品的试剂。

染料纯度：通过高效液相色谱（HPLC）测定的纯度 > 99%。

分子量：137。

激发波长（Lambda - Ex）：250纳米。

发射波长（Lambda - Em）：428纳米。

样本用量：每个样本的聚糖用量范围为25皮摩尔至25纳摩尔。

适用样本：任何具有游离还原末端的纯化聚糖均可进行标记。

结构完整性：唾液酸、岩藻糖、硫酸盐或磷酸盐的损失不可检测（< 2摩尔百分比）。

标记效率：通常 > 85%（取决于样本）。

标记选择性：基本实现化学计量标记。

操作流程

1. 纯化聚糖：LudgerClean EB10小柱（LC - EB10 - A6）专为从蛋白质、盐和洗涤剂中纯化聚糖而设计。

2. 将样本转移至反应管：对于从典型糖蛋白中获得的聚糖混合物，样本量应在100皮摩尔至50纳摩尔范围内。如果是单一纯聚糖，最少5皮摩尔就可在后续高效液相色谱分析中被标记和检测到。合适的反应管包括小型聚丙烯微量离心管和用于聚合酶链反应（PCR）的管子。

3. 干燥样本：如果样本体积超过10微升，则需干燥样本。

如果需要干燥样本，应使用离心蒸发器进行。如果不可行，则可谨慎使用冷冻干燥（冻干法）（尤其要确保样本在管底形成一小团紧密的固体）。不要使样本处于高温（> 28°C）或极端pH条件下，因为这些条件会导致酸催化唾液酸丢失（高温、低pH）或聚糖还原端差向异构化（高pH）。

样本干燥后，将其重悬于10微升水中。

4. （仅适用于LT - KAB - A2）制备DMSO - 乙酸混合液：向装有DMSO的管中加入150微升冰醋酸，通过移液操作混合均匀。

5. 加入染料：将DMSO - 乙酸混合液加入到装有2 - AB（2 - 氨基苯甲酰胺酸）染料的管中，混合至染料完全溶解。

6. 加入还原剂：将溶解后的染料加入到装有氰基硼氢化钠或2 - 吡啶硼烷的管中，通过移液操作混合至还原剂完全溶解，制成最终的标记试剂。

7. 将标记试剂加入样本：向每个干燥的聚糖样本中加入标记试剂，盖紧微量离心管，充分混合。

8. 孵育：将反应管置于加热块、砂浴盘或设定为65°C的干燥烤箱中孵育3小时。在大多数情况下，孵育时间可缩短至2小时或延长至4小时，而不会显著改变标记反应的结果。

9. 离心并冷却：孵育结束后，取出样本，短暂离心微量离心管，然后让其完全冷却至室温。

10. 样本清洗：建议进行标记后样本清洗，以去除多余的染料和其他标记试剂 。