产品说明书：

https://www.ludger.com/docs/products/lt/lt-kaa/ludger-lt-kaa-vp24-guide.pdf

产品规格

传统的2 - AA和2 - AB标记试剂盒在聚糖标记过程中使用氰基硼氢化钠作为还原剂。该试剂有毒，因此操作时需使用通风橱。为符合新兴的健康与安全法规，我们现在用新的VP聚糖试剂盒替代它们，该试剂盒使用吡啶硼烷，这是一种安全性显著更高的还原剂。

2 - AA标记试剂盒包含两组以下试剂（每组可供15个样品使用），装于纯氮气密封的玻璃安瓿中：

LT - KAA - VP24

2 - 氨基苯甲酸（2 - AA染料）

二甲基亚砜（DMSO）/乙酸溶液

2 - 吡啶硼烷

应用：用于游离聚糖与2 - 氨基苯甲酸（2 - AA）的标记。

描述：该试剂盒包含用于通过还原胺化反应将染料共价连接到聚糖游离还原端的试剂。

染料特性：质量 = 137。荧光性，激发波长（聚糖 - 染料共轭物）= 250 nm，发射波长 = 425 nm。为获得最佳的检测灵敏度，我们建议激发波长为250 nm。

样品用量：每个样品的聚糖用量从25 pmol到25 nmol不等。

样品数量：一个2 - AA标记试剂盒包含的试剂足以标记多达30个独立的分析样品。

染料纯度：通过高效液相色谱法测得 > 99%

分子量：137

激发波长（Lambda - Ex）：320 nm

发射波长（Lambda - Em）：420 nm

适用样品：任何带有游离还原端的纯化聚糖均可标记。

结构完整性：唾液酸、岩藻糖、硫酸盐或磷酸盐无可检测（< 2摩尔百分比）的损失。

标记效率：通常 > 85%（取决于样品）。

标记选择性：基本为化学计量比标记。

操作流程

1. 纯化聚糖：LudgerClean EB10小柱（LC - EB10 - A6）专为从蛋白质、盐和洗涤剂中纯化聚糖而设计。

2. 将样品转移至反应小瓶：对于从典型糖蛋白中获得的聚糖混合物，样品用量应在100皮摩尔 - 50纳摩尔范围内。对于单个纯聚糖，低至5皮摩尔的样品也能在随后的高效液相色谱分析中被标记和检测到。合适的反应小瓶包括小型聚丙烯微量离心管和用于聚合酶链反应（PCR）的小管。

3. 干燥样品：如果样品体积超过10 μL，则需干燥样品。

如果需要干燥样品，应使用离心蒸发器进行。若不可行，则可谨慎使用冷冻干燥法（尤其要确保样品在小瓶底部形成一小团紧密的干物质）。不要使样品处于高温（> 28°C）或极端的pH条件下，因为这些条件会导致酸催化唾液酸丢失（高温、低pH）或聚糖还原端差向异构化（高pH）。

样品干燥后，将其重溶于10 μL水中。

4. （仅限LT - KAA - A2）制备DMSO - 乙酸混合液：向装有DMSO的小瓶中加入150 μL冰醋酸，并通过移液操作混合。

5. 加入染料：将DMSO - 乙酸混合液加入到装有2 - AA（2 - 氨基苯甲酸）染料的小瓶中，混合直至染料溶解。

6. 加入还原剂：将溶解后的染料加入到装有氰基硼氢化钠或吡啶硼烷的小瓶中，通过移液操作混合直至还原剂完全溶解，制成最终的标记试剂。

7. 向样品中加入标记试剂：向每个干燥的聚糖样品中加入标记试剂，盖紧微量离心管并充分混合。

8. 孵育：将反应小瓶置于加热块、砂浴或设定为65°C的干燥烘箱中孵育3小时。在大多数情况下，孵育时间可缩短至2小时或延长至4小时，而不会显著改变标记反应的结果。

9. 离心并冷却：孵育结束后取出样品，短暂离心微量离心管，然后让其完全冷却至室温。

10. 样品纯化：建议进行标记后样品纯化，以去除多余的染料和其他标记试剂 。

带有更安全还原剂的LudgerTag™ 2AB和2AA聚糖标记试剂盒数据：

https://www.ludger.com/docs/products/lt/lt-kaa/ludger-lt-kaa-vp24-overview.pdf