使用LudgerTag DMB唾液酸标记试剂盒,通过高效液相色谱(HPLC)分析用DMB(1,2 - 二氨基 - 4,5 - 亚甲基二氧苯.2HCl)标记的唾液酸变体荧光基团。
两个LudgerSep R1柱串联可用于分析2AB标记的抗体聚糖。这对于G1、G2、G3聚糖的分离、岩藻糖基化/非岩藻糖基化聚糖的分离、具有平分GlcNAc/非平分GlcNAc聚糖的分离以及MAN5与中性复杂双触角聚糖的分离特别有效 。
产品说明书:
https://www.ludger.com/docs/products/ls/r1/ludger-ls-r1-guide.pdf
https://www.ludger.com/docs/products/ls/r1/ludger-ls-r1-2ab-guide.pdf
产品规格 - LudgerSep™ R1柱
应用:用于分析用DMB(1,2 - 二氨基 - 4,5 - 亚甲基二氧苯.2HCl)标记的唾液酸变体。
描述:LudgerSep™ R1高效液相色谱(HPLC)柱包含具有十八烷基硅烷涂层的颗粒,该涂层针对疏水色谱进行了优化。
颗粒:3微米硅胶经十八烷基硅烷涂层衍生化处理,孔径为120埃。
柱尺寸:
货号 直径×长度 柱体积
LS - R1 - 4.6x150 4.6×150毫米 2.49毫升
流速:典型流速为0.3 - 2.0毫升/分钟。
柱压:压力不得超过2000磅/平方英寸(psi)。
pH范围:2 - 8
温度:典型操作温度为30℃,但对于某些样品,提高温度可能改善分离度。温度范围为15 - 50℃。
溶剂:用于DMB标记唾液酸分析的典型溶剂系统,使用7:9:84甲醇:乙腈:水作为溶剂A,乙腈作为溶剂B。溶剂应进行脱气处理。避免使用强氧化剂和阴离子洗涤剂。
柱管:不锈钢材质
柱保护:在柱前安装一个0.2微米的在线过滤器是一种良好的做法。
样品量:可加载到柱上的聚糖样品的最大量取决于聚糖组分的数量和类型以及任何非聚糖物质的性质。成功进行色谱分析运行的典型范围是每个样品峰10飞摩尔 - 1纳摩尔,总聚糖量最多可达200纳摩尔。
适用样品:DMB标记的唾液酸
样品制备:如有需要,通过0.2微米滤器过滤样品。避免DMB标记样品暴露于光照。将样品用水稀释(参见LT - KDMB - A1指南)。
样品检测:荧光检测,激发波长为373纳米,发射波长为448纳米。
操作注意事项:确保所使用的任何玻璃器皿、塑料制品或溶剂均无糖苷酶和环境碳水化合物。在所有样品处理过程中使用无粉手套,并避免环境碳水化合物污染。
安全:请阅读所有使用化学品的安全数据表(SDS)。所有涉及标记试剂的操作过程应采用适当的个人安全防护措施 - 护目镜、耐化学腐蚀手套(例如丁腈手套)等 - 并在适当情况下在实验室通风橱内操作。
仅用于研究用途。不可用于人体或药物。
高效液相色谱系统要求
LudgerSep R1柱可与任何能够在0.3 - 2.0毫升/分钟流速下提供精确梯度的高效液相色谱泵系统配合使用。一般来说,在泵头之后(高压下)混合溶剂的系统具有较低的死体积,并且能提供更精确的梯度,这对于LudgerSep柱所需的流速来说是合适的。我们建议将样品进样体积保持在25微升或更低,理想情况下使用满环进样。虽然本指南中展示了一个色谱图示例,但保留时间会根据所使用的高效液相色谱系统而有所不同 。