产品说明书：

https://www.ludger.com/docs/products/ls/n2/ludger-ls-n2-guide.pdf

产品质量规格

**应用**：

用于通过高效液相色谱（HPLC）分析和纯化Ludger标记物（LudgerTag™）荧光基团和紫外发色团标记的糖类。直径为2毫米的柱子推荐用于液相色谱 - 质谱联用（LC - MS）应用。

**描述**：

Ludger分离™ N2高效液相色谱柱包含具有聚合物酰胺涂层的颗粒，该涂层针对复杂糖类混合物的高分辨率色谱分析进行了优化。

**颗粒**：

颗粒粒径为3微米，具有80埃的孔径以及聚合物酰胺涂层。

**柱子尺寸**：

 目录编号                        描述                                                  尺寸 

 LS - N2 - 4.6x150           Ludger分离™ N2高效液相色谱柱           4.6×150毫米 

LS - N2 - 2.0x150            Ludger分离™ N2高效液相色谱柱           2.0×150毫米 

**流速**：

典型流速：对于4.6毫米柱为0.4 - 1.0毫升/分钟；对于2.0毫米柱为0.15 - 0.22毫升/分钟。

**柱压**：

最大压力：对于4.6毫米柱为2250磅/平方英寸（150千克/平方厘米）；对于2.0毫米柱为2900磅/平方英寸（195千克/平方厘米）。

**pH范围**：

2.0 - 7.5

**温度**：

典型操作温度为30℃。温度范围为10 - 40℃。

**溶剂**：

糖类分析的典型溶剂系统包括乙腈和含甲酸铵（pH 4.4）的水性缓冲液的梯度。推荐的缓冲液是50毫摩尔的甲酸铵（pH 4.4），有50毫升小包装可供配制2升使用（卢德格目录编号：LS - N - BUFFX40）。

**运输溶剂**：

75%乙腈 - 25%水

**储存**：

长期储存时，应用从操作缓冲液到100%水的梯度冲洗柱子，然后再用含水量超过50%（体积比）的乙腈水溶液作为储存溶剂冲洗。

**柱保护**：

将所有溶剂过滤至0.2微米，并使用氦气鼓泡或真空脱气。在将所有样品上样到柱子之前，使用0.2微米滤膜过滤样品。在样品注射器和柱子之间安装在线过滤器。

**样品量**：

可加载到柱子上的糖类样品的最大量取决于糖类组分的数量和类型以及任何非糖类物质的性质。成功分析运行的典型范围是每个样品峰10飞摩尔 - 1纳摩尔，总糖类最多可达200纳摩尔。

**适用样品**：

适用的样品包括用以下卢德格标记物™标签标记的糖类：2 - AA（2 - 氨基苯甲酸）、2 - AB（2 - 氨基苯甲酰胺）、AA - Ac（3 - （乙酰氨基） - 6 - 氨基吖啶）

**样品制备**：

将样品过滤至0.2微米，然后使用离心蒸发器干燥。对于4.6毫米柱，将样品注入最多100微升的起始缓冲液（即HPLC梯度开始时使用的溶剂混合物）中。对于2毫米柱，将样品注入最多25微升的起始缓冲液（即HPLC梯度开始时使用的溶剂混合物）中。

**样品检测**：

根据所使用的染料，可采用荧光检测、质谱检测或紫外吸收检测（参见相应的Ludger标记物™操作指南）。

**操作注意事项**：

确保所使用的任何玻璃器皿、塑料器皿或溶剂均不含糖苷酶和环境碳水化合物。在所有样品处理过程中使用无粉手套，并避免与环境碳水化合物接触。

**安全注意事项**：

请阅读所使用所有化学品的安全数据表（MSDS）。所有涉及标记试剂的过程都应使用适当的个人安全防护装备，如护目镜、耐化学腐蚀的手套（例如丁腈手套）等，并在适当情况下在实验室通风橱中进行操作。

**使用限制**：

仅用于研究用途。不得用于人体或药物用途。

**HPLC系统要求**：

Ludger分离™ N2柱可与能够在0.3 - 1.0毫升/分钟流速下为4.6毫米直径柱提供精确梯度，或在50 - 300微升/分钟流速下为2毫米直径柱提供精确梯度的HPLC系统一起使用。一般来说，在泵头之后（高压下）混合洗脱液的系统死体积更低，能提供更精确的梯度，适用于Ludger分离™柱所需的流速。对于4.6毫米柱，将样品注入最多100微升的起始缓冲液（即HPLC梯度开始时使用的溶剂混合物）中；对于2毫米柱，将样品注入最多25微升的起始缓冲液（即HPLC梯度开始时使用的溶剂混合物）中。

需要配备荧光检测器，其检测波长如下：

 荧光标记                               激发波长λex（纳米）      发射波长λem（纳米） 

 2 - AB [2 - 氨基苯甲酰胺]                              330                               420 

 2 - AA [2 - 氨基苯甲酸]                                 330                               420 

AA - Ac [3 - （乙酰氨基） - 6 - 氨基吖啶]         442                              525 

为了实现最佳检测效果，应使用较宽的狭缝宽度（例如10 - 20纳米）。根据所使用检测器的灵敏度，可检测到亚皮摩尔水平的2 - AB或2 - AA标记的糖类，并能获得良好的信噪比。

为了提高糖类分析的重复性和中间精密度，建议使用柱温控制器。柱温为35℃时可得到良好的结果。