产品说明书：

https://www.ludger.com/docs/products/ls/n1/ludger-ls-n1-guide.pdf

产品规格

**应用**：

用于通过高效液相色谱（HPLC）分析和纯化卢德格标记物（LudgerTag™）荧光基团和紫外发色团标记的糖类。

**描述**：

Ludger分离™ N1高效液相色谱柱包含具有聚合物酰胺涂层的颗粒，该涂层针对复杂糖类混合物的高分辨率色谱分析进行了优化。

**颗粒**：

颗粒粒径为5微米，具有80埃的孔径以及聚合物酰胺涂层。

**柱子规格**：

 货号                              描述                                             直径×长度             体积 

 LS - N1 - 4.6x10      Ludger分离™ N1保护柱                 4.6×10毫米          0.17毫升 

 LS - N1 - 4.6x250   Ludger分离™ N1高效液相色谱柱    4.6×250毫米          4.2毫升 

**柱管**：不锈钢材质

**流速**：

典型流速为0.4 - 1.0毫升/分钟。最大流速为1.2毫升/分钟。

**柱压**：

最大压力为2250磅/平方英寸（150千克/平方厘米）。

**pH范围**：

2.0 - 7.5

**温度**：

典型操作温度为30℃。最高温度范围为10 - 80℃。

**溶剂**：

糖类分析的典型溶剂系统包括乙腈（水溶液）和含甲酸铵（pH 4.4）缓冲液的梯度。该溶剂系统可从卢德格公司获取，并可进行稀释后使用。（货号：LS - N - BUFFX40）

**运输溶剂**：

75%乙腈 - 25%水

**清洗溶剂**：

 - 水[用于去除键合相上的极性溶质]

 - 45%乙腈（水溶液）[用于解吸疏水性化合物]

 - 0.1%三乙胺的80%乙腈溶液[用于去除解吸的碱性化合物]

 - 50毫摩尔/升甲酸铵（pH 4.4）/乙腈（1:1 v/v）[用于去除离子型化合物]

**储存**：

长期储存前，应用至少5倍柱体积的75%乙腈（水溶液）冲洗柱子。

**柱保护**：

将所有溶剂过滤至0.2微米，并使用氦气鼓泡或真空脱气。在将所有样品上样到柱子之前，使用0.2微米滤膜过滤样品。在样品注射器和柱子之间安装优质在线过滤器。如需了解最适合使用的样品和在线过滤器的建议，请联系我们。

**样品量**：

可加载到柱子上的糖类样品的最大量取决于糖类组分的数量和类型以及任何非糖类物质的性质。成功分析运行的典型范围是每个样品峰1皮摩尔 - 1纳摩尔，总糖类最多可达200纳摩尔。

**适用样品**：

适用的样品包括用以下卢德格标记物™标签标记的糖类：2 - AA（2 - 氨基苯甲酸）、2 - AB（2 - 氨基苯甲酰胺）、AMAC（2 - 氨基吖啶酮）、2 - AP（2 - 氨基吡啶）、AMC（7 - 氨基 - 4 - 甲基香豆素）、ABEE（4 - 氨基苯甲酸乙酯）。

**样品制备**：

 - 将样品过滤至0.2微米，然后使用离心蒸发器干燥。

 - 用5 - 50微升起始缓冲液（即HPLC梯度开始时使用的溶剂混合物）重新溶解，然后进样。

 - 如有可能，在溶解后尽快进样，以尽量减少在高有机溶剂条件下样品沉淀的问题。

**样品检测**：

根据所使用的染料，采用荧光检测或紫外吸收检测（参见相应的Ludger标记物™操作指南）。

**操作注意事项**：

确保所使用的任何玻璃器皿、塑料器皿或溶剂均不含糖苷酶和环境碳水化合物。在所有样品处理过程中使用无粉手套，并避免与环境碳水化合物接触。

**安全注意事项**：

请阅读所使用所有化学品的安全数据表（SDS）。所有涉及标记试剂的过程都应采用适当的个人安全防护措施，如护目镜、耐化学腐蚀的手套（例如丁腈手套）等，并在适当情况下在实验室通风橱中进行操作。

**使用限制**：

仅用于研究用途。不得用于人体或药物用途。

**HPLC系统要求**：

卢德格分离™ N1柱可与能够在0.3 - 1.0毫升/分钟流速下提供精确梯度的HPLC系统一起使用。一般来说，在泵头之后（高压下）混合洗脱液的系统具有较低的死体积，并能提供更精确的梯度，适用于Ludger分离™柱所需的流速。

对于4.6毫米柱，将样品注入最多100微升的起始缓冲液（即HPLC梯度开始时使用的溶剂混合物）中。

需要配备荧光检测器，其检测波长如下：

 荧光标记                                                             激发波长λex（纳米）     发射波长λem（纳米） 

2 - AB [2 - 氨基苯甲酰胺]                                                  330                         420 

2 - AA [2 - 氨基苯甲酸]                                                     330                         420 

AA - Ac [3 - （乙酰氨基） - 6 - 氨基吖啶]                         442                         525 

为了实现最佳检测效果，应使用较宽的狭缝宽度（例如10 - 20纳米）。根据所使用检测器的灵敏度，可检测到亚皮摩尔水平的2 - AB或2 - AA标记的糖类，并能获得良好的信噪比。

为了提高糖类分析的重复性和中间精密度，建议使用柱温控制器。柱温为35℃时可得到良好的结果。