产品说明书：

https://www.ludger.com/docs/products/ls/n1/ludger-ls-n1-guide.pdf

产品规格

**应用**：利用高效液相色谱（HPLC）对Ludger标记物（LudgerTag™）荧光基团和紫外发色团标记的糖类进行分析与纯化。

**描述**：Ludger分离™ N1高效液相色谱柱包含具有聚合物酰胺涂层的颗粒，该涂层针对复杂糖类混合物的高分辨率色谱分析进行了优化。

**颗粒**：颗粒大小为5 µm，孔径为80埃，带有聚合物酰胺涂层。

     货号                                      直径×长度                      尺寸        体积 

 LS-N1-4.6x10  Ludger分离™ N1保护柱                 4.6×10毫米  0.17毫升 

LS-N1-4.6x250  Ludger分离™ N1高效液相色谱柱  4.6×250毫米 4.2毫升 

**柱管**：不锈钢材质

**流速**：典型流速为0.4 - 1.0毫升/分钟。最大流速为1.2毫升/分钟

**柱压**：最大压力为2250磅/平方英寸（150千克/平方厘米）

**pH范围**：2.0 - 7.5

**温度**：典型操作温度为30℃。最高温度范围为10 - 80℃。

**溶剂**：糖类分析的典型溶剂系统包括乙腈（水溶液）梯度以及含有甲酸铵（pH 4.4）的缓冲液。该溶剂系统可从卢德格公司获取，并可进行稀释后使用。目录编号：LS-N-BUFFX40

**运输溶剂**：75%乙腈 - 25%水

**清洗溶剂**：

- 水[用于去除键合相上的极性溶质]

- 45%乙腈（水溶液）[用于解吸疏水性化合物]

- 0.1%三乙胺溶于80%乙腈[用于去除解吸后的碱性化合物]

- 50 mM甲酸铵（pH 4.4）/乙腈（1:1 v/v）[用于去除离子型化合物]

**储存**：长期储存前，需用至少5倍柱体积的75%乙腈（水溶液）冲洗柱子。

**柱保护**：

- 所有溶剂需经0.2 µm滤膜过滤，并采用氦气鼓泡或真空脱气法进行脱气处理。

- 所有样品在加载到柱子之前，需使用0.2 µm滤膜进行过滤。

- 在样品注射器和柱子之间安装优质的在线过滤器。如需了解最合适的样品和在线过滤器的建议，请联系我们。

**样品量**：可加载到柱子上的糖类样品的最大量取决于糖类组分的数量和类型以及任何非糖类物质的性质。成功进行分析运行的典型范围是每个样品峰1皮摩尔 - 1纳摩尔，总糖类最多可达200纳摩尔。

**适用样品**：适用的样品包括用以下Ludger标记物™标签标记的糖类：2 - AA（2 - 氨基苯甲酸）、2 - AB（2 - 氨基苯甲酰胺）、AMAC（2 - 氨基吖啶酮）、2 - AP（2 - 氨基吡啶）、AMC（7 - 氨基 - 4 - 甲基香豆素）、ABEE（4 - 氨基苯甲酸乙酯）。

**样品制备**：

- 将样品用0.2 µm滤膜过滤，然后使用离心蒸发器进行干燥处理。

- 用5 - 50 µl起始缓冲液（即高效液相色谱梯度开始时所用的溶剂混合物）重新溶解样品，然后进行注射。

- 如有可能，在溶解后尽快注射样品，以尽量减少在高有机溶剂条件下样品沉淀的问题。

**样品检测**：根据所使用的染料，采用荧光检测或紫外吸收检测（请参考相应的Ludger标记物™操作指南）。

**操作注意事项**：

- 确保所使用的玻璃器皿、塑料器皿或溶剂中不含糖苷酶和环境碳水化合物。

- 在所有样品处理过程中，需使用无粉手套，并避免样品受到环境碳水化合物的污染。

**安全注意事项**：

- 请阅读所使用所有化学品的安全数据表（SDS）。

- 所有涉及标记试剂的操作过程，均应采取适当的个人安全防护措施，如佩戴护目镜、耐化学腐蚀的手套（例如丁腈手套）等。并且在适当情况下，应在实验室通风橱内进行操作。

**仅限研究用途。不得用于人体或药物用途**

**高效液相色谱系统要求**：

- Ludger分离™ N1柱可与能够在0.3 - 1.0毫升/分钟流速下提供精确梯度的高效液相色谱系统配合使用。一般来说，在泵头之后（高压条件下）混合洗脱液的系统具有较低的死体积，并能提供更精确的梯度，适用于卢德格分离™柱所需的流速。

- 对于4.6毫米柱，将样品注射到最多100 µl的起始缓冲液（即高效液相色谱梯度开始时所用的溶剂混合物）中。

- 需配备荧光检测器，其检测波长如下：

            荧光标记物                                                 激发波长λex（纳米）  发射波长λem（纳米）

 2 - AB [2 - 氨基苯甲酰胺]                                          330                              420 

2 - AA [2 - 氨基苯甲酸]                                              330                              420 

AA - Ac [3 - (乙酰氨基) - 6 - 氨基吖啶]                     442                               525 

- 为了实现最佳检测效果，需使用较宽的狭缝宽度（例如10 - 20纳米）。根据所使用检测器的灵敏度不同，可检测到亚皮摩尔水平的2 - AB或2 - AA标记糖类，并且具有较好的信噪比。

- 为了提高糖类分析的重复性和中间精密度，建议使用柱温控制器。当柱温为35℃时，可获得良好的结果。