重组肽N - 糖苷酶F的发现故事

在生物化学和分子生物学的发展历程中，对于糖蛋白的研究一直是一个备受关注的领域。糖蛋白是一类重要的生物分子，它们在细胞识别、信号传导、免疫反应等众多生理过程中发挥着关键作用。而糖基化修饰，作为糖蛋白的一个重要特征，其复杂性和多样性给研究带来了诸多挑战。

早期的研究中，科学家们致力于探索如何有效地解析糖蛋白上的糖基化结构。在这个过程中，他们发现需要一种能够特异性地切割糖蛋白上N - 连接糖苷键的工具酶。传统的糖苷酶在某些方面存在局限性，无法满足研究的需求。

经过多年的努力和不懈探索，研究人员从特定的微生物中筛选出了一种具有独特活性的酶。这种酶能够精准地识别并切割糖蛋白上的N - 连接糖苷键，释放出聚糖部分，同时保持蛋白质部分的完整性。通过对这种酶的深入研究和基因工程技术的应用，科学家们成功地将其进行了重组表达和优化，最终得到了我们现在所熟知的重组肽N - 糖苷酶F。

这一发现为糖蛋白的研究提供了强有力的工具，使得科学家们能够更加深入地了解糖基化修饰的奥秘，为揭示生命过程中的许多重要机制奠定了基础。

 重组肽N - 糖苷酶F在生物药质量监控中的应用

随着生物技术的飞速发展，生物药物在疾病治疗中发挥着越来越重要的作用。然而，生物药的复杂性也给质量控制带来了巨大的挑战。糖基化修饰作为生物药的一个重要质量属性，对药物的疗效、安全性和药代动力学等方面都有着深远的影响。重组肽N - 糖苷酶F在生物药质量监控中的应用主要体现在以下几个方面：

 1. 糖基化分析

- **聚糖结构解析**：重组肽N - 糖苷酶F可以特异性地切割生物药中糖蛋白的N - 连接糖苷键，将聚糖从蛋白质上释放出来。通过进一步的分离和分析技术，如高效液相色谱（HPLC）、质谱（MS）等，可以对聚糖的结构进行详细的解析，包括聚糖的组成、连接方式、分支结构等。这有助于了解生物药的糖基化特征，评估其质量和一致性。

- **糖基化异质性研究**：生物药在生产过程中可能会出现糖基化异质性的问题，即同一药物分子上的糖基化修饰存在差异。重组肽N - 糖苷酶F可以帮助研究人员分离和分析这些不同糖基化状态的分子，深入了解糖基化异质性的产生原因和影响因素，从而采取相应的措施进行质量控制和改进生产工艺。

 2. 药物纯度检测

- **去除糖基化杂质**：在生物药的生产过程中，可能会引入一些糖基化杂质，这些杂质可能会影响药物的疗效和安全性。重组肽N - 糖苷酶F可以特异性地切割这些杂质中的糖苷键，将其转化为易于检测和去除的形式，从而提高药物的纯度。

- **检测宿主细胞残留糖蛋白**：生物药通常是在宿主细胞（如哺乳动物细胞、细菌细胞等）中生产的，宿主细胞可能会分泌一些自身的糖蛋白，这些糖蛋白可能会残留在药物中。重组肽N - 糖苷酶F可以用于检测和去除这些宿主细胞残留的糖蛋白，确保药物的安全性和质量。

 3. 工艺优化和质量控制

- **工艺监测**：在生物药的生产工艺中，糖基化修饰是一个重要的质量控制指标。重组肽N - 糖苷酶F可以作为一种监测工具，用于实时监测生产工艺过程中糖基化修饰的变化情况。通过对不同生产阶段的样品进行分析，及时发现和解决可能影响药物质量的问题，优化生产工艺，提高产品的质量和稳定性。

- **质量标准和规范制定**：基于重组肽N - 糖苷酶F的糖基化分析结果，可以为生物药的质量标准和规范制定提供重要的依据。通过建立合理的糖基化质量指标和检测方法，确保生物药的质量符合相关的法规和标准要求，保障患者的用药安全和有效性。

总之，重组肽N - 糖苷酶F作为一种重要的工具酶，在生物药质量监控中发挥着不可或缺的作用。它为深入了解生物药的糖基化修饰特征、提高药物质量、保障用药安全提供了有力的技术支持。

重组肽N-糖苷酶F；Ludger 货号：E-rPNG01；

产品说明书：

https://www.qa-bio.com/docs/E-RPNG01.QA-Bio.specsheet.pdf

产品规格：

PNGase F 来源：来自伊丽莎白金菌（Elizabethkingia miricola）的重组 PNGase F 基因，在大肠杆菌（E. coli）中表达。

EC 编号：3.5.1.52

别名：PNGase F、肽 N-糖苷酶 F、N-糖苷酶、N-聚糖酶

试剂盒包含：

Ludger 重组 PNGase F - 试剂盒成分

- 含有 60 µL 重组 PNGase F（0.3 U），溶于 20 mM Tris-HCl 缓冲液，pH 7.5

- 5x PNGase F 反应缓冲液 7.5 - 250 mM 磷酸钠，pH 7.5

- PNGase F 变性溶液 - 2% SDS，1 M β-巯基乙醇

- PNGase F Triton X-100 溶液 - 15% 溶液

比活性：>25 U/mg

活性：5 U/mL

分子量：36,000 道尔顿

PNGase F 的 pH 范围：6 - 10，最适 pH 为 7.5

（操作规程）PNGase F 建议使用方法：

1. 向一个 Eppendorf 管中加入最多 200 µg 糖蛋白。用去离子水定容至最终体积 35 µL。

2. 加入 10 µL 5x PNGase F 反应缓冲液 7.5 和 2.5 µL PNGase F 变性溶液。在 100°C 下加热 5 分钟。

3. 冷却。加入 2.5 µL PNGase F Triton X-100 溶液并混合均匀。

4. 向反应体系中加入 2.0 µL PNGase F。在 37°C 下孵育 3 小时。

特异性：PNGase F 能够从糖蛋白上切割天冬酰胺连接的（N-连接）寡糖。PNGase F 将天冬酰胺脱氨基为天冬氨酸，同时保持寡糖的完整性。变性处理可使切割速率提高至 100 倍。大多数天然蛋白质仍可被完全 N-去糖基化，但需要延长孵育时间。PNGase F 在孵育条件下至少可保持 72 小时的活性。PNGase F 不会去除植物糖蛋白中常见的含有 α(1,3)-连接核心岩藻糖的寡糖；对于这种情况，请使用肽 N-糖苷酶 A。

比活性的定义：在 37°C、pH 7.5 条件下，每分钟催化从 1 微摩尔变性 RNase B 上释放 N-连接寡糖所需的酶量。通过 SDS-PAGE 监测切割情况（切割后的 RNase B 迁移速度更快）。

储存条件：将酶储存在 4°C。