**NA4 (A4G4)多糖序列分析以及用途**

 **1. NA4 (A4G4)多糖序列分析**

NA4 (A4G4) 是一种四触角复杂型N-多糖，属于高度唾液酸化的糖蛋白糖基化修饰形式。其序列分析主要包括以下几个方面：

- **基本结构**  

  NA4 (A4G4) 是一种四触角（tetra-antennary）N-多糖，包含四个分支结构，每个分支末端通常带有唾液酸（Neu5Ac）残基，同时含有N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）、甘露糖（Man）和半乳糖（Gal）等单糖单元。其核心结构为**GlcNAcβ1-2Manα1-6(GlcNAcβ1-2Manα1-3)Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc**，并在分支末端添加唾液酸残基（α2-3或α2-6连接）。

- **序列分析技术**  

  1. **质谱分析（Mass Spectrometry, MS）**  

     - 高分辨质谱（如ESI-MS或MALDI-TOF-MS）用于确定NA4多糖的分子量和组成。  

     - 碎片离子分析（MS/MS）可以解析分支结构和单糖序列。  

  2. **高效液相色谱（HPLC）**  

     - 使用LudgerSep™ HPLC柱分离NA4多糖的不同分支结构，结合外标法进行定量分析。  

  3. **核磁共振（NMR）**  

     - 通过1H-NMR和13C-NMR技术解析多糖的空间结构和单糖残基的连接方式。  

  4. **糖苷酶消化**  

     - 使用特异性糖苷酶（如唾液酸酶、半乳糖酶、甘露糖酶）逐步降解多糖，结合HPLC或质谱分析验证序列和分支结构。  

  5. **荧光标记与电泳**  

     - 使用LudgerTag荧光标记技术结合毛细管电泳（CE）进行高灵敏度的序列分析。

- **序列分析的意义**  

  - 确定NA4多糖的精确结构，为研究其生物学功能提供基础数据。  

  - 验证生物类似药或糖蛋白药物中糖基化修饰的质量和一致性。  

  - 为糖类药物开发（如抗肿瘤药物）提供结构优化依据。

 **2. NA4 (A4G4)多糖的用途**

NA4 (A4G4)多糖因其独特的结构和生物学特性，在多个领域具有广泛的应用价值：

**2.1 生物医学研究**

- **抗肿瘤活性研究**  

  NA4多糖具有显著的抗肿瘤活性，其机制包括：  

  - **免疫调节**：通过激活巨噬细胞、NK细胞和T细胞，增强机体的抗肿瘤免疫反应。  

  - **诱导肿瘤细胞凋亡**：通过调控PI3K/Akt、MAPK等信号通路，诱导肿瘤细胞程序性死亡。  

  - **抗血管生成**：抑制VEGF信号通路，减少肿瘤相关血管生成。  

  - **抑制肿瘤转移**：通过降低肿瘤细胞的黏附和侵袭能力，减少转移风险。  

- **糖基化修饰研究**  

  NA4多糖作为高度唾液酸化的N-多糖，是研究糖基化修饰对蛋白质功能影响的理想模型。其在单克隆抗体、融合蛋白等生物药物中的作用已被广泛研究。

**2.2 生物类似药开发**

- **糖基化质量控制**  

  在生物类似药的开发中，NA4多糖可作为标准品，用于监测糖基化修饰的质量和一致性。其应用包括：  

  - 糖基化结构的定性和定量分析。  

  - 验证生物类似药与原研药的糖基化相似性。  

  - 优化生产工艺以提高糖基化质量。  

- **免疫原性评估**  

  NA4多糖的研究有助于评估生物类似药的免疫原性风险，确保其安全性和有效性。

**2.3 糖类药物开发**

- **新型抗肿瘤药物**  

  基于NA4多糖的抗肿瘤活性，可开发新型糖类药物，用于治疗乳腺癌、结肠癌、肺癌等多种肿瘤。  

- **抗炎和免疫调节剂**  

  NA4多糖的免疫调节作用使其在抗炎药物开发中具有潜力，可用于治疗自身免疫疾病和慢性炎症性疾病。  

 诊断试剂开发**

- **糖蛋白检测标记物**  

  NA4多糖可作为糖蛋白检测的标记物，用于开发高灵敏度的诊断试剂。  

- **肿瘤标志物研究**  

  NA4多糖的结构特征与某些肿瘤密切相关，可作为肿瘤标志物的研究方向。

NA4 (A4G4)多糖标准品 ；NA4 Glycan (A4G4)；CN-NA4-20U;

四触角N-多糖，含有末端半乳糖残基。（规格：10微克）质荷比（m/z）：2370.8566  

该多糖存在于多种哺乳动物糖蛋白和人α-1酸性糖蛋白（hAAGP）中。该产品通常通过肼解法从hAAGP中释放寡糖池，并结合高效液相色谱（HPLC）和糖苷酶消化进行纯化。  

产品说明书：

https://www.ludger.com/docs/products/cn/na/na4/ludger-cn-na4-guide.pdf

产品规格

**NA4 多糖**  

**同义词**：NA4 N-连接寡糖  

**描述**：无唾液酸化、半乳糖基化的四触角复杂型N-多糖（寡糖）。  

**分子量**：2373  

**纯度**：通过1H-NMR和HPLC联合分析，纯度>90%。  

**来源**：该多糖存在于多种哺乳动物糖蛋白和人α-1酸性糖蛋白（hAAGP）中。该产品通常通过肼解法从hAAGP中释放寡糖池，并结合高效液相色谱（HPLC）和糖苷酶消化进行纯化。  

**形态**：干燥。通过离心蒸发从水溶液中干燥而成。  

**储存**：溶解前后均需储存于-20°C。该产品在供应状态下至少可稳定保存5年。  

**运输**：干燥状态下可在常温下运输。溶解后需用干冰运输。  

**操作**：将未开封的小瓶置于室温下，轻轻敲击未开封的小瓶以确保大部分冻干物位于瓶底。小心打开瓶盖，加入所需体积的重构介质，重新盖紧瓶盖并充分混合，使所有寡糖完全溶解。为最大化寡糖的回收率，请确保清洗瓶盖内衬，并在使用前短暂离心重构后的小瓶。确保所用的玻璃器皿、塑料器皿或溶剂均不含糖苷酶和环境碳水化合物。尽量减少暴露于高温或极端pH条件。高温和低pH会导致去唾液酸化，高pH会导致还原端GlcNAc的差向异构化。  

**安全性**：该产品为非危险品，已从经认证无所有危险物质（包括病原生物制剂）的天然来源中纯化。  

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多糖的HPLC分析  

LudgerPure未标记多糖和LudgerTag标记多糖可通过多种HPLC（高效液相色谱）方法分离和分析，使用LudgerSep™ HPLC柱。  

LudgerSep柱适用于以下应用：  

通过阴离子交换柱分离带电和中性多糖：  

- LS-C3-7.5×75 LudgerSep C3 – 7.5x75mm  

- LS-C2-4.6×50 LudgerSep C2 – 4.6x50mm  

 通过正相柱分析中性和带电多糖：  

- LS-N2-2.0×250 LudgerSep N2 – 2.00x250mm  

- LS-N2-4.6×250 LudgerSep N2 – 4.6x250mm  

- LS-N1-4.6×250 LudgerSep N1  

LudgerSep N2柱是从复杂多糖混合物中纯化和分析LudgerTag标记寡糖的特别有效工具。如需针对特定应用的建议，请联系我们。  

质谱和电泳  

LudgerPure和LudgerTag标记多糖也可通过质谱、电泳和各种光谱技术进行分析。如需关于适合您分析的最佳染料和分析条件的建议，请联系我们。