唾液酸化核心1型 o多糖，C1S(3)1 标准品，2AB标记，ludger货号CAB-C1S(3)1-01 

产品规格说明  

核心1型与唾液酸化O-多糖标准品概述  

核心1型O-多糖结构特征：  

核心1型O-多糖由**半乳糖（Gal）通过β1-3键连接N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）**构成，是哺乳动物糖蛋白（如黏蛋白及分泌型糖蛋白）中最常见的O-糖基化基础结构。  

唾液酸化修饰：  

本产品为**α2,3-唾液酸化核心1型O-多糖**（Neu5Ac-α2-3-Gal-β1-3-GalNAc），即唾液酸（Neu5Ac）通过α2,3键连接至核心1型糖链的半乳糖残基上，形成**唾液酸化修饰结构**。  

荧光标记：  

糖链经**2-氨基苯甲酸（2AB）荧光标记**，适用于高灵敏度检测（如HPLC-FLD、CE-LIF）。  

应用背景：  

O-糖基化广泛存在于生物药（如促红细胞生成素EPO、TNF-α抑制剂Enbrel、人凝血因子VIII/FVIII）及黏蛋白型糖蛋白中，核心1型与核心2型O-糖链是主要结构类型，可进一步延伸唾液酸等单糖修饰。  

2AB标记唾液酸化核心1型O-糖链（C1S(3)1）详细参数 

产品描述  

2AB标记的α2,3-唾液酸化核心1型O-多糖（C1S(3)1），纯度＞90%（经CE-毛细管电泳与HPLC联合验证），适用于HPLC/UPLC分析中的峰归属及系统适用性测试。  

规格参数

- 定量规格：100皮摩尔（100 pmol）  

- 物理形态：冻干粉末，通过离心蒸发法从水溶液体系中干燥制得  

- 纯度：＞90%（CE-HPLC联合评估）  

- 储存条件：  

  - 溶解前/后均需保存于-20℃环境  

  - 未开封状态下稳定性≥5年  

- 运输要求：  

  - 冻干状态可常温运输  

  - 溶解后需干冰冷链运输  

操作指南

1. 复溶前处理：  

   - 将未开封样品瓶恢复至室温，轻叩瓶底使冻干物聚集至瓶底。  

2. 复溶步骤：  

   - 缓慢开盖，加入适量复溶缓冲液（如50 mM ammonium bicarbonate, pH 8.0），重新密封后温和混匀。  

   - 关键操作：  

     * 用复溶介质冲洗瓶盖内衬，确保无残留冻干物；  

     * 复溶后短暂离心（3000 rpm, 2 min）去除颗粒。  

3. 检测兼容性：  

   - HPLC-FLD：C18反相柱（4.6×250 mm），流动相A（乙腈）/B（含0.1%甲酸的水溶液），梯度洗脱程序（示例）：  

     - 0-5 min: 10% A → 20% A  

     - 5-15 min: 20% A → 40% A  

     - 15-20 min: 40% A → 10% A  

   - CE-LIF：分离电压15 kV，荧光检测器激发波长330 nm/发射波长420 nm。  

4. 注意事项：  

   - 避免使用含还原剂（如DTT）或高盐缓冲液，防止标记基团降解；  

   - 所有玻璃/塑料器皿及溶剂需确保无糖苷酶残留及环境碳水化合物污染；  

   - 操作环境温度需控制在15-25℃，避免高温或极端pH（＜pH 6或＞pH 9）导致糖链结构破坏。  

安全性

本产品为非危险品，原料经合成路径制备并认证，不含病原生物制剂等危害物质，符合生物制药级安全标准。  

质量控制与合规性  

- 纯度检测：HILIC-HPLC（亲水相互作用色谱）联合CE（毛细管电泳）双重验证，确保无杂质峰干扰。  

- 文件支持：每批次提供COA（质量分析证书）、HPLC/CE检测报告及SDS（安全数据表），满足制药行业审计要求。  

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 糖基化修饰对ADC药物性能的影响与优化

1. 唾液酸化核心1型O-多糖（C1S(3)1）的结构与特性  

- 结构特征：  

  C1S(3)1是核心1型O-糖链（Gal-β1-3-GalNAc）的唾液酸化修饰变体，其末端半乳糖（Gal）残基通过α2,3-键连接唾液酸（Neu5Ac），形成**Neu5Ac-α2-3-Gal-β1-3-GalNAc**结构。  

- 关键特性：  

  - 唾液酸化修饰增加糖链的负电荷密度，影响抗体表面电位；  

  - 可能干扰抗体与Fcγ受体（如FcγRIIIa）的结合，调控ADCC/CDC效应；  

  - 增强抗体在血液中的稳定性，延长半衰期（减少肾清除）。  

2. 在ADC药物中的具体应用场景 

(1) 影响ADC药物的偶联效率 

- 空间位阻效应：  

  C1S(3)1的唾液酸化结构可能占据抗体Fc段的空间位点（如糖基化修饰位点附近的赖氨酸或半胱氨酸残基），降低连接子（Linker）与抗体的偶联效率，导致药物抗体比（DAR）分布不均。  

- 电荷干扰：  

  唾液酸的负电荷可能影响连接子的静电吸附能力（尤其对带正电的连接子），需通过优化连接子设计（如引入中性或正电荷基团）补偿。  

(2) 调控ADC药物的稳定性与清除率  

- 血液半衰期延长：  

  唾液酸化修饰可减少抗体被肾脏滤过清除（唾液酸化的糖链掩盖抗体表面的电荷，降低肾小球亲和力），从而延长ADC药物在血液循环中的时间，提高肿瘤组织的暴露量。  

- 非特异性结合风险：  

  过量的唾液酸化可能导致ADC药物与肝脏唾液酸受体（如ASGR）结合增加，引发肝脏蓄积和脱靶毒性，需通过控制唾液酸化比例（如优化细胞培养条件）平衡清除率。  

(3) 影响ADC药物的疗效与免疫原性* 

- 肿瘤靶向性：  

  唾液酸化修饰可能改变抗体与肿瘤细胞表面抗原的结合亲和力（如HER2、Trop2等靶点），需通过体外结合实验（SPR、ELISA）验证偶联前后的亲和力变化。  

- 免疫原性风险：  

  异常的唾液酸化模式（如高唾液酸化或非人源化唾液酸类型）可能增加ADC药物的免疫原性，引发机体产生抗药物抗体（ADA），降低药物持久性。  

3. 工艺开发与质量控制策略  

(1) 工艺优化方向  

- 细胞培养调控：  

  - 通过添加唾液酸前体（如N-乙酰甘露糖胺）或抑制唾液酸酶活性，调控抗体中C1S(3)1的唾液酸化比例（目标：20%-40%唾液酸化水平）。  

  - 使用糖基化工程化细胞株（如敲除α2,3-唾液酸转移酶基因）减少非人源化唾液酸修饰。  

- 偶联工艺适配：  

  - 选择对唾液酸化不敏感的连接子（如马来酰亚胺-缬氨酸-瓜氨酸二肽连接子，MC-VC-PABC）或定点偶联技术（如THIOMAB™技术），减少糖基化对偶联效率的影响。  

(2) 质量控制标准 

- 关键质量属性（CQAs）：  

  - C1S(3)1唾液酸化比例（HILIC-HPLC或LC-MS/MS检测）；  

  - ADC药物的DAR值分布（疏水相互作用色谱，HIC）；  

  - 抗体与FcγRIIIa的结合亲和力（SPR检测）。  

- 分析方法：  

  - 唾液酸化定量：LC-MS/MS（精确测定Neu5Ac含量）或HILIC-HPLC（分离不同唾液酸化变体）；  

  - 糖基化异质性分析：CE-LIF（高分辨率分离C1S(3)1与其他O-糖链）；  

  - 功能验证：ADCC/CDC活性检测（基于报告基因或细胞模型）。  

4. 案例研究：唾液酸化C1S(3)1对ADC药物性能的影响  

案例背景：某HER2靶向ADC药物在临床前研究中观察到：  

- 高唾液酸化组：（C1S(3)1唾液酸化比例＞50%）：  

  - 药物半衰期延长（AUC提升2倍），但肝脏蓄积增加（ALT/AST升高）；  

  - ADCC效应减弱（因唾液酸化干扰FcγRIIIa结合）。  

- 优化组（唾液酸化比例控制在30%-40%）：  

  - 肿瘤靶向性显著提高（肿瘤/血液比值提升50%）；  

  - 脱靶毒性降低（肝脏蓄积减少30%），疗效与安全性平衡。  

工艺调整：通过优化细胞培养基中的唾液酸前体浓度，并结合定点偶联技术，最终实现C1S(3)1唾液酸化比例的精准控制。  

- “α2,3-唾液酸化”是哺乳动物中常见的唾液酸连接方式，但某些肿瘤细胞可能表达非人源化的α2,6-唾液酸化模式，需通过糖基化工程化细胞株避免免疫原性风险。  

- “定点偶联技术”（如THIOMAB™）可减少糖基化对ADC药物性能的影响，成为高唾液酸化抗体药物开发的重要工具。

Ludger 是一家位于英国专门从事药物的糖基化分析和研究的生物科技公司。

我们可以为制药公司进行设计、测量以及控制药物糖基化的安全性和有效性。

公司技术是用在FDA的质量控制和EMEA批准的全球生物制药，可用于支持IND申报。

Ludger的客户包括世界各地top的制药公司和生物技术公司。

Ludger药品生产涵盖了全面符合ICH-生物制药的糖基化分析试剂和检测试剂盒。

产品包括多糖释放试剂盒、多糖标记和纯化试剂盒、标记聚糖、多糖HPLC柱、内糖苷酶和糖蛋白标准品等。同时Ludger会继续开发新的产品，以确保为您提供更高品质产品。

 此外，我们还为客户提供糖基化分析、培训以及相关的产品和服务等。

您可以通过不同的方式使用我们糖基化分析服务。我们可以帮助您选择适合您需求的最佳方法。我们有多年的专业经验进行糖蛋白中N-和O-聚糖分析，糖蛋白包括：单克隆抗体、Fc融合蛋白、促红细胞生成素以及其他治疗性糖蛋白。

英国Ludger生物科技有限公司中国办事处
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