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英国Ludger生物科技有限公司中国办事处

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Ludger唾液酸-- NeuAc(唾液酸)和NeuGc(神经氨酸)的定量分析

药物糖基化可以大大改变生物医药的临床安全性和有效性

            -------必须正确处理糖基化,否则会遇到很多问题

众所周知,唾液酸是糖链的重要组成成分,是维持EPO 体内生物效应所必需的。唾液酸含量影响净负电荷从而改善了糖蛋白药物(如促红细胞生成素EPO) 的代谢动力学,糖基化对稳定 EPO 的体内活性具有重要作用 ,若缺乏糖链 ,则 EPO 在体内迅速被水解而失活 。 


Ludger可以提供唾液酸分析服务

NeuAc(唾液酸)和NeuGc(神经氨酸)的定量分析是监管机构在生物制药表征的产品标准规格指南中提出的一个要求。特别是,人类和非人类的唾液酸 (NeuAc / NANANeuGc / NGNA分别)相对水平测定是非常重要的,因为有些病人有高水平的抗神经氨酸(anti-NeuGc)抗体,这可导致中和反应和快速清除含有神经氨酸(NeuGc)的生物药品 (Nguyen,2005)

由于唾液酸(NeuAc)和神经氨酸(NeuGc)在分析糖蛋白中具有重要意义,它通常被认为是生物治疗药物的关键质量属性(CQA)

较广泛的唾液酸(NeuAc)和神经氨酸(NeuGc)比例确定方法是如下:

    通过轻度酸水解放糖蛋白上的唾液酸残基。

    1-1,2 - 二氨基-4,5 - 亚甲基苯酚(DMB)荧光标记释放的唾液酸。

    通过高效液相色谱法(HPLC)或超高效液相色谱法(UHPLC)对DMB标记的唾液酸进行相对定量分析。

LudgerDMB标记试剂盒(货号:LT-KDMB-A1),提供从糖蛋白释放唾液酸并用DMB标记的所有功能。该试剂盒包含可以检测高达22个糖蛋白样品(每样品含50-100 μg糖蛋白)的试剂和材料。每个标记可标记每个样品中大约10 pmol2.5 nmol的唾液酸。

试剂盒中包含一系列唾液酸的参考标准品(含Neu5AcNeu5GcNeu57Ac2Neu5Gc9AcNeu59Ac2Neu 5,7,8),9Ac3Gc),以及NeuAcNeuGc的定量标准品。这三个标准品可以随着释放的唾液酸样品进行DMB标记。

系列稀释液制备后的NeuAcNeuGc定量标准品可用于定量分析。LudgerTag™DMB试剂盒中有提供关于如何制备的说明. 如有需要NeuAcNeuGc定量标准品也可在另行购买,请跟我们联系。

作为阳性对照,我们建议使用包含NeuAcNeuGc唾液酸的胎球糖蛋白,我们同样建议使用最纯化的LudgerBioQuantTM糖肽标准品来作为阳性对照。这个糖肽标准品(货号: BQ-GPEP-A2G2S2-10U)是一个复杂的N-连接双触角聚糖,终止于两个N-乙酰神经氨酸。

使用此标准品可以检查聚糖释放、标记和回收的有效性,并可增强您的唾液酸测量准确性。Ludger还销售可用于识别Neu59Ac2的标准品。水可以作阴性对照。


   1:由LS-UR2 UHPLC色谱柱(货号LS-UR2-2.1x100)分析出来的DMB-标记唾液酸对照品。

为了检测聚糖的分离该对照品也可以作为跑样之前的系统适用性标准品。

唾液酸分析相关产品

商品型号

英文品名

中文品名

包装

LT-KDMB-A1

DMB Sialic Acid Labeling Kit

DMB 唾液酸释放标记试剂盒

1Reaction Set

LS-R1-4.6x150

Ludger Sep R1 HPLC Column

R1 HPLC 色谱柱-唾液酸

4.6 x150 mm

LS-UR2-2.1x100

Ludger Sep UR2 UHPLC Column–sialic acids

UR2 UHPLC 色谱柱-唾液酸

2.1 x 100 mm

CM-NEU-AC-01

N-acetylneuraminic acid quantitative standard

N-乙酰神经氨酸定量标准品

1 nmol

CM-NEU-GC-01

N-glycolyneuraminic acid quantitative standard

N-羟乙酰神经氨酸定量标准品

1 nmol

CM-NEU5,9,AC-01

N-acetylneuraminic  acid qualitative standard

N-乙酰神经氨酸定性标准品

1 nmol

BQ-GPEP-A2G2S2

A2G2S2 glycopeptide standard

A2G2S2 糖肽标准品(用于唾液酸释放和标记过程)

10 μg

GCP-FET-50U-X4

Fetuin  Glycoprotein (4 x 50 ug)

胎球糖蛋白(4×50微克)(唾液酸化阳性对照)

4 x 50 μg

 

唾液酸相关产品资讯信息:

唾液酸定量分析应用(唾液酸分析的重要性,如何操作,如何选择产品)

http://www.ludgersh.com/9ysh/up/updown/201811041674205.pdf

糖基化唾液酸分析WCBP-2018-poster(唾液酸分析workflow,数据分析对比)

http://www.ludgersh.com/9ysh/up/updown/201831472509545.pdf

 

Ludger Guide to Sialylation: I Neu5Ac and Neu5Gc Quantitation: http://www.ludgersh.com/9ysh/up/updown/20153341151521.pdf

Ludger Guide to Sialylation: II Highly Sialylated Glycoproteins:http://www.ludgersh.com/9ysh/up/updown/20153342384057.pdf

唾液酸分析试剂盒中英文说明书:

http://www.ludgersh.com/9ysh/up/updown/201812435793881.pdf 最新版

http://www.ludgersh.com/9ysh/up/updown/201651155293545.pdf 中文旧版仅做参考

更多详细资料参考:https://www.ludger.com/dmb-sialic-acid-analysis/

 


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